RESP18 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-422652

Panoramica

Resp18 codifica RESP18, una proteina associata ai granuli secretori neuroendocrini, arricchita nelle cellule delle isole pancreatiche e in altri tessuti a secrezione regolata. RESP18 è implicata nella biogenesi dei granuli secretori e nello smistamento del carico, sostenendo il rilascio ormonale dipendente dallo stimolo e il mantenimento del contenuto dei granuli. Grazie al suo legame con l’esocitosi regolata e con l’omeostasi delle cellule endocrine, Resp18 rappresenta un punto di accesso molecolare per lo studio delle vie che controllano la maturazione dei granuli di insulina e la dinamica della secrezione. Fenotipi di alterata organizzazione dei granuli o di secrezione ormonale in modelli sperimentali rendono Resp18 rilevante per la ricerca sulle disfunzioni metaboliche ed endocrine.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO RESP18 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Resp18 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Resp18 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Resp18 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina RESP18.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Resp18 per lo studio della segnalazione di RESP18, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Resp18 critici per la funzione di RESP18
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Resp18 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal RESP18 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal RESP18 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Resp18. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal RESP18 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR RESP18 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Resp18 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Resp18 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.