REPS1 Plasmide Double Nickase (h): sc-409347-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- REPS1 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il REPS1 Double Nickase Plasmid (h) e il REPS1 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira REPS1. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
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| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
REPS1 Plasmide Double Nickase (h) | sc-409347-NIC | 20 µg | $410.00 |
REPS1 (proteina 1 contenente un dominio Eps associata a RALBP1) codifica una proteina adattatrice implicata nell’endocitosi mediata da clatrina e nel traffico dei recettori attraverso interazioni con RalBP1/RLIP76 e con fattori accessori dell’endocitosi. Collegando la segnalazione delle piccole GTPasi alla formazione di vescicole e all’internalizzazione del carico, REPS1 può influenzare vie a valle che dipendono dalla disponibilità regolata dei recettori, inclusa la segnalazione di fattori di crescita e delle risposte allo stress. I processi associati a REPS1 si intersecano con la dinamica del citoscheletro e il rimodellamento di membrana, collegandolo alla migrazione cellulare, all’adesione e all’attenuazione del segnale. La disregolazione degli adattatori endocitici e dei componenti della via di Ral è stata associata ad alterazioni della segnalazione proliferativa e a fenotipi invasivi nella biologia del cancro, stimolando studi meccanicistici della funzione di REPS1 in modelli cellulari umani.
REPS1 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus REPS1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di REPS1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di REPS1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con REPS1 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.