Rent2 Plasmide Double Nickase (m): sc-435860-NIC
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- Rent2 Plasmide Double Nickase (m) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il Rent2 Double Nickase Plasmid (m) e il Rent2 Double Nickase Plasmid (m2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira Upf2. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: Rent2 Antibody (G-10): sc-374230
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
Rent2 Plasmide Double Nickase (m) | sc-435860-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Rent2 Plasmide Double Nickase (m2) | sc-435860-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Upf2 (Rent2) del topo codifica un fattore essenziale di sorveglianza dell’RNA richiesto per il decadimento dell’mRNA mediato da nonsenso (NMD), una via che rileva e degrada i trascritti contenenti codoni di terminazione prematuri per mantenere la fedeltà del proteoma. RENT2 agisce insieme ai componenti centrali dell’NMD, come UPF1 e UPF3, e collega la terminazione della traduzione al rimodellamento degli mRNP, influenzando la stabilità dell’mRNA, gli esiti dello splicing alternativo e la regolazione del trascrittoma in risposta allo stress. L’attività di Upf2 incide sullo sviluppo neuronale, sull’omeostasi immunitaria e sull’integrità della linea germinale, e la deregolazione dell’NMD è stata associata a fenotipi neuroevolutivi, al buffering di trascritti rilevanti per il cancro e a risposte alterate allo stress genotossico o proteotossico. La perturbazione sperimentale di Upf2 è ampiamente utilizzata per studiare il controllo qualità dell’RNA, la sorveglianza traduttiva e la robustezza dell’espressione genica nelle cellule di mammifero.
Rent2 Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Upf2 nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Upf2. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Upf2. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Upf2 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.