Rent1 Plasmide Double Nickase (m): sc-422649-NIC

Il gene murino Upf1 (Rent1) codifica un’elicasi dell’RNA ATP-dipendente che è centrale nella degradazione dell’mRNA mediata da nonsenso (NMD), una via di sorveglianza dell’RNA conservata che riconosce codoni di terminazione prematuri e promuove la degradazione di trascritti aberranti. UPF1 coopera con i fattori di terminazione della traduzione e con le proteine SMG per innescare il rimodellamento delle mRNP, la degradazione dell’RNA e la regolazione del controllo qualità del trascrittoma. Oltre alla NMD canonica, UPF1 contribuisce al turnover dell’mRNA, alle risposte allo stress replicativo e alla stabilità del genoma attraverso interazioni con reti di processamento dell’RNA e di risposta al danno al DNA. Un’attività di UPF1 deregolata è stata associata ad alterazioni della proteostasi e della segnalazione di stress in modelli di disfunzione del neurosviluppo, biologia del cancro e regolazione dell’infiammazione, supportandone l’uso in studi meccanicistici focalizzati su specifiche vie.

Rent1 Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Upf1 nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Upf1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Upf1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Upf1 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.