RelB Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-400371-ACT

RELB umano codifica RelB, un fattore di trascrizione della famiglia NF-κB che forma eterodimeri attivi con p52 (NFKB2) per attivare la segnalazione NF-κB non canonica. RelB regola programmi genici che controllano la differenziazione delle cellule immunitarie, le risposte infiammatorie e antivirali, l’organogenesi linfoide e la sopravvivenza cellulare, attraverso una traslocazione nucleare dipendente dallo stimolo e il legame a promotori/enhancer. L’attività di RELB è comunemente collegata a vie a valle di recettori quali CD40, BAFFR e LTβR, integrando segnali che rimodellano la cromatina e la trascrizione nei compartimenti mieloide e linfoide. Una segnalazione di RELB deregolata è stata associata a infiammazione cronica, disfunzioni immunitarie e stati trascrizionali oncogenici in molteplici contesti tumorali, rendendolo un nodo utile per studi meccanicistici sul riassetto della rete NF-κB.

RelB Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di RELB senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

RelB Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus RELB nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione RELB, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di RelB. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus RELB nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da RelB nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via RelB nelle cellule tumorali con espressione di RELB silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.