Relaxin Receptor 1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-417299

Panoramica

RXFP1 codifica il recettore della relaxina 1, un GPCR che lega peptidi della famiglia della relaxina per regolare la segnalazione cAMP/PKA e MAPK, la produzione di ossido nitrico e programmi trascrizionali che influenzano il rimodellamento della matrice extracellulare. In fibroblasti, muscolatura liscia e cellule vascolari, l’attività di RXFP1 modula migrazione e adesione cellulari e il turnover della matrice attraverso un cross-talk con le vie TGF-β/SMAD e quelle mediate dalle integrine. Alterazioni della segnalazione di RXFP1 sono state associate a risposte fibrotiche dis-regolate e all’omeostasi del tessuto connettivo, rendendolo rilevante per studi su fibrosi d’organo, biologia vascolare e fisiologia dell’apparato riproduttivo. In quanto recettore di superficie con un bias di segnalazione dipendente dal contesto, RXFP1 viene anche utilizzato per studiare desensibilizzazione e internalizzazione dei GPCR, nonché l’accoppiamento con gli effettori a valle.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Relaxin Receptor 1 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene RXFP1 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del RXFP1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto RXFP1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Relaxin Receptor 1.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di RXFP1 per lo studio della segnalazione di Relaxin Receptor 1, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni RXFP1 critici per la funzione di Relaxin Receptor 1
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di RXFP1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Relaxin Receptor 1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal Relaxin Receptor 1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus RXFP1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Relaxin Receptor 1 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR Relaxin Receptor 1 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia RXFP1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio RXFP1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.