RELA/NFκB p65 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-400004-ACT

RELA codifica la subunità p65 di NF-κB, un fattore di trascrizione centrale che controlla programmi genici inducibili responsabili di infiammazione, segnalazione immunitaria innata e adattativa, sopravvivenza cellulare e risposte allo stress. In seguito all’attivazione da vie come quelle del recettore del TNF, del recettore dell’IL-1, dei recettori Toll-like e del recettore dell’antigene, p65 forma dimeri (comunemente con NFKB1/p50), trasloca nel nucleo e regola l’espressione di citochine, chemochine, molecole di adesione e fattori anti-apoptotici. L’attività di RELA è modulata dal sequestro citoplasmatico mediato da IκB e da modificazioni post-traduzionali dipendenti dallo stimolo, che regolano il legame alla cromatina e l’output trascrizionale. Una segnalazione NF-κB/RELA deregolata è frequentemente associata a stati infiammatori cronici, programmi trascrizionali oncogenici e interazioni con il microambiente rilevanti per la progressione tumorale e l’elusione immunitaria.

RELA/NFκB p65 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di RELA senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

RELA/NFκB p65 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus RELA nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione RELA, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di RELA/NFκB p65. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus RELA nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da RELA/NFκB p65 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via RELA/NFκB p65 nelle cellule tumorali con espressione di RELA silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.