Reg IIIγ Plasmide di attivazione CRISPR (m): sc-422640-ACT

Reg3g codifica la proteina 3 gamma derivata dagli isolotti pancreatici (Reg IIIγ), una lectina C di tipo secretorio arricchita nei compartimenti dell’epitelio intestinale e delle cellule di Paneth, che contribuisce alla difesa della barriera mucosale legando il peptidoglicano batterico e modulando le interazioni ospite–microbiota. La sua espressione è fortemente indotta da vie di rilevamento citochinico e microbico, incluse la segnalazione IL-22/STAT3 e le risposte immunitarie innate dipendenti dai recettori Toll-like, collegando Reg IIIγ ai programmi di riparazione dell’epitelio e di attività antimicrobica. Un’attività alterata della famiglia REG3 è stata associata a stati infiammatori a livello delle superfici di barriera, rendendo Reg3g un marcatore utile e un nodo meccanicistico per lo studio dell’infiammazione intestinale, della disbiosi e delle risposte dell’epitelio allo stress in modelli murini.

Reg IIIγ Il plasmide di attivazione CRISPR (m) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di Reg3g senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

Reg IIIγ Il plasmide di attivazione CRISPR (m) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus Reg3g nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione Reg3g, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di Reg IIIγ. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus Reg3g nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da Reg IIIγ nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via Reg IIIγ nelle cellule tumorali con espressione di Reg3g silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.