RECS1 Plasmide Double Nickase (m): sc-427482-NIC
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- RECS1 Plasmide Double Nickase (m) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il RECS1 Double Nickase Plasmid (m) e il RECS1 Double Nickase Plasmid (m2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira Tmbim1. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
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| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
RECS1 Plasmide Double Nickase (m) | sc-427482-NIC | 20 µg | $410.00 |
Il gene murino **Tmbim1** codifica **RECS1**, un regolatore transmembrana conservato della sopravvivenza cellulare, collegato all’omeostasi delle membrane del reticolo endoplasmatico e dei mitocondri. RECS1 è associato alla modulazione della suscettibilità all’apoptosi e della segnalazione adattativa allo stress, incluse vie legate alla gestione del calcio, alla risposta alle proteine mal ripiegate (UPR) e al turnover autofagia-lisosoma. Attraverso questi processi, Tmbim1 è stato studiato in contesti in cui una proteostasi deregolata e la morte cellulare programmata contribuiscono a danno tissutale e fenotipi degenerativi. La biologia di RECS1 è quindi rilevante per studi meccanicistici sulle reti di segnalazione dello stress, sui checkpoint di sopravvivenza e sulla regolazione dell’apoptosi associata alle membrane nei modelli murini.
RECS1 Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Tmbim1 nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Tmbim1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Tmbim1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Tmbim1 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.