RECK Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-402440

Panoramica

RECK (proteina ricca di cisteina con motivi Kazal in grado di indurre la reversione) è un regolatore ancorato alla membrana del rimodellamento della matrice extracellulare che sopprime l’attività di diverse metalloproteinasi della matrice, tra cui MMP2, MMP9 e MT1-MMP. Limitando la proteolisi pericellulare, RECK influenza l’adesione cellula–matrice, la migrazione e l’invasione, e si interseca con vie di segnalazione che governano l’angiogenesi e la morfogenesi tissutale. L’espressione di RECK è frequentemente ridotta in diversi contesti tumorali ed è associata a un comportamento invasivo alterato e al potenziale metastatico, rendendola un nodo chiave negli studi sui fenotipi di malattia guidati dal microambiente. Inoltre, il controllo dell’attività proteasica dipendente da RECK la collega al rimodellamento infiammatorio e a processi legati alla fibrosi, in cui il turnover della matrice extracellulare è deregolato.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO RECK (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene RECK in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del RECK insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto RECK a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina RECK.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di RECK per lo studio della segnalazione di RECK, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni RECK critici per la funzione di RECK
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di RECK per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal RECK CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal RECK CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus RECK. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal RECK Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR RECK (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia RECK per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio RECK definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.