Rec8 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-404152-ACT

Il gene umano **REC8** codifica **Rec8**, una subunità della coesina associata alla meiosi che contribuisce a stabilire e mantenere la coesione tra cromatidi fratelli e supporta l’appaiamento e la ricombinazione dei cromosomi omologhi. Modellando la dinamica del complesso della coesina, Rec8 contribuisce alla fedeltà della segregazione cromosomica e ai processi di riparazione del DNA che si intersecano con vie più ampie di stabilità del genoma. La regolazione alterata dei componenti della coesina, inclusi fattori ristretti alla meiosi espressi ectopicamente in contesti somatici, è studiata in relazione ad aneuploidia, stress replicativo e fenotipi di instabilità cromosomica rilevanti per il cancro e la biologia riproduttiva. REC8 è quindi un bersaglio utile per analizzare il controllo della ricombinazione dipendente dalla coesione, la segnalazione dei checkpoint e l’architettura cromosomica.

Rec8 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di REC8 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

Rec8 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus REC8 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione REC8, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di Rec8. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus REC8 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da Rec8 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via Rec8 nelle cellule tumorali con espressione di REC8 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.