RBPMS Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-403369-ACT

RBPMS (proteina legante l’RNA con splicing multiplo) è una proteina citoplasmatica che lega l’RNA e riconosce elementi ricchi in U per regolare l’espressione genica post-trascrizionale, inclusi stabilità, localizzazione e splicing alternativo dell’RNA. È ampiamente utilizzata come marcatore dell’identità delle cellule muscolari lisce vascolari e delle cellule gangliari della retina e partecipa a programmi che controllano l’organizzazione del citoscheletro, la motilità e la differenziazione. Attraverso la modulazione del destino dell’RNA, RBPMS influenza reti trascrizionali e di segnalazione che modellano le transizioni di stato cellulare e le risposte allo stress. Un’alterata espressione di RBPMS è stata riportata in diversi contesti rilevanti per il rimodellamento vascolare, la fibrosi e i fenotipi delle cellule tumorali, supportandone lo studio nella plasticità cellulare associata alle malattie.

RBPMS Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di RBPMS senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

RBPMS Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus RBPMS nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione RBPMS, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di RBPMS. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus RBPMS nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da RBPMS nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via RBPMS nelle cellule tumorali con espressione di RBPMS silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.