RBM7 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-408808-ACT

RBM7 umano codifica una proteina legante l’RNA che funge da componente centrale del complesso NEXT (Nuclear Exosome Targeting), associandosi a ZCCHC8 e SKIV2L2/MTR4 per convogliare specifici RNA nucleari verso l’esosoma dell’RNA, dove vengono processati e degradati. RBM7 riconosce preferenzialmente elementi ricchi in uridina (U) e contribuisce alla sorveglianza dell’RNA promuovendo il turnover dei trascritti a monte del promotore, degli enhancer RNA e di altri RNA non codificanti a breve emivita, modellando così l’output trascrizionale e mantenendo l’omeostasi dell’RNA nucleare. Accoppiando il controllo qualità dell’RNA con la trascrizione e con il metabolismo degli RNA associati alla cromatina, RBM7 influenza la stabilità del genoma e programmi di espressione genica responsivi allo stress. La disregolazione delle vie di degradazione dell’RNA nucleare che coinvolgono RBM7 è stata associata ad alterazioni delle reti di regolazione genica ed è rilevante per studi sul rimodellamento trascrizionale associato al cancro e su fenotipi neuroevolutivi legati a difetti nel processamento dell’RNA.

RBM7 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di RBM7 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

RBM7 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus RBM7 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione RBM7, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di RBM7. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus RBM7 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da RBM7 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via RBM7 nelle cellule tumorali con espressione di RBM7 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.