RBM38 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-403488-ACT

RBM38 (RNA binding motif protein 38) è una proteina umana legante l’RNA che modula la regolazione genica post-trascrizionale controllando stabilità, localizzazione e traduzione degli mRNA. È implicata nel controllo del ciclo cellulare e nei programmi di risposta allo stress attraverso interazioni specifiche di sequenza con i trascritti bersaglio, influenzando vie legate a proliferazione e differenziamento. L’attività di RBM38 interseca reti di processamento dell’RNA e può modellare circuiti regolatori associati a p53 modulando l’espressione di fattori coinvolti nelle risposte di checkpoint. Una disregolazione dell’espressione di RBM38 è stata riportata in molteplici contesti rilevanti per la malattia, rendendola un nodo utile per lo studio di meccanismi incentrati sull’RNA che influenzano il fenotipo cellulare.

RBM38 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di RBM38 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

RBM38 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus RBM38 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione RBM38, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di RBM38. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus RBM38 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da RBM38 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via RBM38 nelle cellule tumorali con espressione di RBM38 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.