RBM35A Plasmide Double Nickase (h): sc-405645-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- RBM35A Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il RBM35A Double Nickase Plasmid (h) e il RBM35A Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira ESRP1. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
RBM35A Plasmide Double Nickase (h) | sc-405645-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
RBM35A Plasmide Double Nickase (h2) | sc-405645-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
ESRP1 (RBM35A) è una proteina epiteliale che regola lo splicing: si lega al pre-mRNA e indirizza programmi di splicing alternativo che distinguono le isoforme trascrittomiche epiteliali da quelle mesenchimali. Contribuisce a mantenere l’identità epiteliale controllando le scelte di splicing in geni coinvolti nell’adesione cellula-cellula, nell’organizzazione del citoscheletro e nella trasduzione del segnale, influenzando processi come l’EMT e la differenziazione epiteliale. Attraverso una regolazione coordinata dell’inclusione e dell’esclusione degli esoni, ESRP1 modella vie legate alla polarità e alla migrazione cellulare, e la sua deregolazione è spesso studiata nel contesto delle transizioni dello sviluppo e del cambiamento fenotipico associato ai tumori. Reti di splicing dipendenti da ESRP1 alterate sono state associate a cambiamenti nelle isoforme legate all’invasività e alla plasticità di linea, rendendolo un bersaglio frequente negli studi meccanicistici sul processamento dell’RNA e sulla biologia del cancro.
RBM35A Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus ESRP1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di ESRP1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di ESRP1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con ESRP1 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.