RBM10 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-418527-ACT

RBM10 codifica una proteina legante l’RNA che regola lo splicing alternativo, la stabilità dell’mRNA e l’assemblaggio dello spliceosoma, influenzando la scelta delle isoforme trascrizionali in diversi programmi genici. Lo splicing dipendente da RBM10 influisce sulla progressione del ciclo cellulare, sull’apoptosi e sulla differenziazione, e si integra con il controllo post-trascrizionale degli output di segnalazione, come i componenti della via di Notch e altri trascritti che regolano la crescita. Un’attività di RBM10 deregolata o mutazioni sono state associate a fenotipi di processamento dell’RNA aberranti osservati in molteplici contesti tumorali e in disordini congeniti dello sviluppo, rendendolo un nodo utile per studiare come le perturbazioni dello splicing rimodellino gli stati cellulari. In quanto regolatore nucleare del metabolismo dell’RNA, RBM10 è spesso studiato per il suo impatto sull’utilizzo degli esoni a livello dell’intero trascrittoma, sulle reti di espressione genica e sul processamento dell’RNA in risposta allo stress.

RBM10 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di RBM10 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

RBM10 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus RBM10 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione RBM10, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di RBM10. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus RBM10 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da RBM10 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via RBM10 nelle cellule tumorali con espressione di RBM10 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.