RANKL Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-423448

Panoramica

Mouse Tnfsf11 codifica per RANKL, un ligando della superfamiglia del TNF espresso dalle cellule stromali della linea osteoblastica e dalle cellule immunitarie attivate, che segnala attraverso il suo recettore RANK (TNFRSF11A) per controllare la differenziazione, l’attivazione e la sopravvivenza degli osteoclasti. L’interazione RANKL–RANK attiva programmi trascrizionali dipendenti da NF-κB, MAPK e NFATc1, fondamentali per il rimodellamento osseo, l’organogenesi dei linfonodi e il crosstalk tra cellule dendritiche e linfociti T. In condizioni fisiologiche, l’attività di RANKL è bilanciata dall’osteoprotegerina (OPG/TNFRSF11B) e contribuisce ad accoppiare l’attivazione immunitaria al turnover scheletrico. Una segnalazione di RANKL deregolata è implicata nell’erosione ossea infiammatoria, nella perdita ossea associata all’osteoporosi e nelle interazioni osteolitiche tra tumore e osso, rendendolo un bersaglio chiave per studi meccanicistici di osteoimmunologia.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO RANKL (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Tnfsf11 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Tnfsf11 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Tnfsf11 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina RANKL.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Tnfsf11 per lo studio della segnalazione di RANKL, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Tnfsf11 critici per la funzione di RANKL
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Tnfsf11 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal RANKL CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal RANKL CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Tnfsf11. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal RANKL Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR RANKL (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Tnfsf11 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Tnfsf11 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.