Rag A Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-427054

Panoramica

Rraga codifica Rag A, una piccola GTPasi correlata a Ras che, insieme a RagB/C/D e al complesso Ragulator, recluta e regola mTORC1 sulla membrana lisosomiale in risposta agli amminoacidi e alla disponibilità di nutrienti. Attraverso l’eterodimerizzazione dipendente dal nucleotide, Rag A contribuisce a collegare il sensing cellulare dei nutrienti al controllo a valle della sintesi proteica, dell’autofagia e della riprogrammazione metabolica tramite la via di mTOR. Alterazioni nella segnalazione delle Rag GTPasi sono associate a cambiamenti nel controllo della crescita, nelle risposte allo stress e nei programmi di attivazione delle cellule immunitarie, rendendo Rraga un utile punto di ingresso per lo studio delle reti di segnalazione dipendenti dai nutrienti. Nei modelli murini, la perturbazione di Rraga può chiarire come la segnalazione centrata sul lisosoma si integri con la regolazione trascrizionale e traduzionale in condizioni fisiologiche e in modelli rilevanti per la malattia.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Rag A (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Rraga in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Rraga insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Rraga a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Rag A.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Rraga per lo studio della segnalazione di Rag A, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Rraga critici per la funzione di Rag A
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Rraga per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Rag A CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal Rag A CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Rraga. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Rag A Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR Rag A (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Rraga per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Rraga definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.