Rad54 Plasmide Double Nickase (h): sc-401750-NIC

RAD54L codifica l’ATPasi umana Rad54 dipendente dal DNA, un componente centrale della ricombinazione omologa che rimodella la cromatina e promuove l’invasione del filamento mediata da RAD51 durante la riparazione delle rotture a doppio filamento del DNA. Rad54 opera all’interno della rete di riparazione del DNA Fanconi anemia/BRCA per sostenere la stabilità delle forche di replicazione, facilitare la riparazione post-replicativa e preservare l’integrità del genoma sotto stress genotossico. L’alterazione di RAD54L compromette la ricombinazione ad alta fedeltà e può spostare la riparazione verso vie più soggette a errori, contribuendo ai riarrangiamenti cromosomici e all’accumulo di mutazioni osservati nella biologia del cancro. RAD54L è quindi ampiamente utilizzato come punto di accesso meccanicistico per studiare la segnalazione della risposta al danno al DNA, la dinamica della ricombinazione e i determinanti dell’instabilità genomica.

Rad54 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus RAD54L nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di RAD54L. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di RAD54L. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con RAD54L interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.