RAD51AP1 Plasmide Double Nickase (h): sc-408187-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- RAD51AP1 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il RAD51AP1 Double Nickase Plasmid (h) e il RAD51AP1 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira RAD51AP1. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
RAD51AP1 Plasmide Double Nickase (h) | sc-408187-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
RAD51AP1 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-408187-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
RAD51AP1 (proteina 1 associata a RAD51) è un fattore di riparazione del DNA che interagisce con RAD51 per promuovere la ricombinazione omologa durante i danni associati alla replicazione e la riparazione delle rotture a doppio filamento. Supporta l’invasione del filamento mediata da RAD51 e la formazione del D-loop, contribuendo alla stabilizzazione e alla riattivazione delle forche di replicazione bloccate e alla preservazione dell’integrità del genoma. L’attività di RAD51AP1 è collegata a processi chiave della risposta al danno del DNA, inclusi il segnalamento del checkpoint della fase S e la risoluzione dello stress replicativo. Un’espressione o una funzione alterata di RAD51AP1 è stata associata a fenotipi di instabilità genomica osservati in molteplici tipi di tumore, rendendolo un bersaglio utile per studi meccanicistici sulle dipendenze delle cellule tumorali dai sistemi di riparazione del DNA.
RAD51AP1 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus RAD51AP1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di RAD51AP1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di RAD51AP1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con RAD51AP1 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.