RACK7 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-411774

Panoramica

ZMYND8 (RACK7) codifica un lettore della cromatina che si lega a istoni acetilati e metilati tramite il suo modulo PHD–bromodominio–PWWP per coordinare la regolazione trascrizionale. RACK7 partecipa ai programmi di rimodellamento della cromatina e di risposta al danno al DNA, integrando i segnali derivanti dalle modifiche istoniche per modulare l’attività degli enhancer e la trascrizione dipendente dall’RNA polimerasi II. È stato collegato alla regolazione della transizione epitelio-mesenchimale, a reti trascrizionali associate all’ipossia e al controllo dell’espressione di geni infiammatori attraverso interazioni con complessi corepressori e di rimodellamento. La disregolazione delle vie della cromatina associate a ZMYND8 è stata riportata nel cancro e in altri disturbi caratterizzati da alterata stabilità del genoma e del controllo trascrizionale.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO RACK7 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene ZMYND8 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del ZMYND8 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto ZMYND8 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina RACK7.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di ZMYND8 per lo studio della segnalazione di RACK7, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni ZMYND8 critici per la funzione di RACK7
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di ZMYND8 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal RACK7 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal RACK7 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus ZMYND8. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal RACK7 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR RACK7 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia ZMYND8 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio ZMYND8 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.