Rab GDI β Plasmide Double Nickase (h): sc-404136-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- Rab GDI β Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il Rab GDI β Double Nickase Plasmid (h) e il Rab GDI β Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira GDI2. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: Rab GDI β Antibody (D-2): sc-515143
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
Rab GDI β Plasmide Double Nickase (h) | sc-404136-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Rab GDI β Plasmide Double Nickase (h2) | sc-404136-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
GDI2 codifica l’inibitore della dissociazione del GDP di Rab beta (Rab GDI β), uno chaperone citosolico che si lega alle Rab GTPasi prenilate e ne regola l’estrazione dalle membrane e il riciclo tra i compartimenti del sistema endomembranoso. Controllando la disponibilità delle Rab e il loro indirizzamento alle membrane, Rab GDI β influenza i processi di gemmazione, trasporto e fusione delle vescicole, centrali per endocitosi, esocitosi e traffico dal Golgi agli endosomi. Questa regolazione incide sul turnover dei recettori, sulla dinamica della via secretoria e sull’identità degli organelli all’interno del ciclo delle Rab GTPasi. Un traffico Rab deregolato e alterazioni della funzione dei regolatori delle Rab sono implicati nelle risposte allo stress cellulare e nelle modifiche della proteostasi osservate in molteplici contesti rilevanti per la malattia, a supporto dell’uso della perturbazione di GDI2 per studiare fenotipi dipendenti dal traffico intracellulare.
Rab GDI β Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus GDI2 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di GDI2. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di GDI2. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con GDI2 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.