Rab GDI α Plasmide Double Nickase (h): sc-404659-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- Rab GDI α Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il Rab GDI α Double Nickase Plasmid (h) e il Rab GDI α Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira GDI1. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: Rab GDI α Antibody (C-7): sc-271846
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
Rab GDI α Plasmide Double Nickase (h) | sc-404659-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Rab GDI α Plasmide Double Nickase (h2) | sc-404659-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
GDI1 codifica Rab GDP dissociation inhibitor alfa, un regolatore citosolico che lega le Rab GTPasi prenilate e ne controlla l’estrazione dalle membrane, la solubilizzazione e il trasferimento ai compartimenti bersaglio durante il traffico vescicolare. Modulando il ciclo delle Rab tra le frazioni associate alla membrana e quelle associate al citosol, Rab GDI α contribuisce a coordinare il trasporto endocitico ed esocitico, l’identità degli organelli e la dinamica delle membrane in vie quali il trasporto endosoma-Golgi e il riciclo delle vescicole sinaptiche. Una corretta funzione di GDI1 sostiene le esigenze di traffico neuronale, e un’alterata regolazione del trasporto dipendente da Rab è stata collegata a fenotipi neuroevolutivi e cognitivi. Nei sistemi umani, GDI1 è spesso studiato come nodo che collega la segnalazione delle Rab GTPasi alla proteostasi, al turnover dei recettori di membrana e alla fedeltà del trasporto specifico di compartimento.
Rab GDI α Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus GDI1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di GDI1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di GDI1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con GDI1 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.