Rab 44 Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-418677-LAC

RAB44 codifica Rab 44, una piccola GTPasi della famiglia Rab atipica, implicata nella regolazione del traffico intracellulare di membrane, della maturazione delle vescicole e della dinamica endolisosomiale. In quanto proteina “interruttore” che cicla tra stati legati a GTP e a GDP, si ritiene che Rab 44 influenzi l’identità dei compartimenti e l’instradamento del carico, intersecando vie secretorie e degradative, inclusi processi associati alla funzione delle cellule immunitarie e alla segnalazione infiammatoria. Un’attività disfunzionale delle Rab GTPasi può alterare il turnover dei recettori, la processazione dell’antigene e la trasduzione del segnale, rendendo RAB44 un bersaglio rilevante per studi sul rimodellamento delle vie di segnalazione nel cancro e nelle patologie a componente immunitaria. L’analisi funzionale di RAB44 supporta indagini meccanicistiche che collegano il controllo del traffico vescicolare agli stati di attivazione cellulare, alle risposte allo stress e alla proteostasi.

Le particelle di attivazione lentivirale Rab 44 (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di RAB44 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale Rab 44 (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione RAB44, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di Rab 44. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo RAB44 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.