Rab 44 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-418677-ACT

RAB44 codifica a Rab44, uma pequena GTPase da família Rab, de grande tamanho, implicada no tráfego vesicular e na dinâmica de membranas que coordenam o transporte intracelular, a organização endolisossomal e a secreção regulada. Como um interruptor molecular que alterna entre estados ligados a GTP e a GDP, espera-se que a Rab44 interaja com a maquinaria de ancoragem e fusão dependente de Rab, que molda a maturação de compartimentos e as saídas de sinalização. Foram relatados padrões de expressão alterados de RAB44 em contextos relacionados ao sistema imune e em transcriptomas de câncer, sustentando seu uso como marcador e como nó funcional para estudar programas de tráfego desregulados em estados celulares associados a doenças. Investigar a atividade da Rab44 pode ajudar a definir como o transporte vesicular influencia a reciclagem de receptores, a sinalização inflamatória e as respostas ao estresse celular.

Rab 44 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de RAB44 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Rab 44 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus RAB44 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição RAB44, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Rab 44. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus RAB44 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Rab 44 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Rab 44 em células tumorais com expressão de RAB44 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.