Rab 26 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-411810-ACT

RAB26はRab 26をコードしており、Rab 26はRabファミリーに属する小型GTPアーゼとして、小胞の出芽、輸送、融合といった過程を協調させることで膜輸送を制御します。Rab 26は、リサイクリング経路や分解経路を介したカーゴの振り分け、特殊な細胞種における小胞ダイナミクスの調節など、分泌およびエンドリソソーム系プロセスに関与することが示されています。輸送装置の空間的な配置や区画の同一性に影響を与えることで、RAB26はシグナル出力や細胞恒常性にも影響し得ます。Rab GTPアーゼ依存的な輸送の破綻は、神経変性様の表現型、がん細胞の挙動、免疫機能障害と関連づけられており、RAB26は疾患関連モデルにおける経路撹乱を研究する上で重要なノードとなります。

Rab 26 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性RAB26の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

Rab 26 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における RAB26 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はRAB26転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性Rab 26の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のRAB26遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるRab 26依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびRAB26発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるRab 26経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。