Rab 25 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-424753

Panoramica

Rab25 codifica la piccola GTPasi Rab25, un membro della sottofamiglia Rab11 che regola il traffico di membrana, inclusi il riciclo endocitico e il trasporto polarizzato di recettori e integrine nelle cellule epiteliali. Attraverso il controllo della gemmazione, dell’ancoraggio e della fusione delle vescicole, Rab25 influenza la polarità cellulare, la migrazione e l’output di segnalazione dei recettori di superficie accoppiati a vie come PI3K–AKT e al riciclo dei recettori per i fattori di crescita. Un’attività di RAB25 deregolata è stata associata ad alterazioni dell’omeostasi epiteliale e a fenotipi legati ai tumori in molteplici tessuti, rendendolo rilevante per lo studio dell’invasione, dei programmi di traffico associati alla metastasi e di funzioni oncogeniche o oncosoppressive dipendenti dal contesto. Nei modelli murini, la perturbazione di Rab25 consente di indagare in modo meccanicistico le reti di trasporto vescicolare nello sviluppo e in comportamenti cellulari rilevanti per la malattia.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Rab 25 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Rab25 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Rab25 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Rab25 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Rab 25.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Rab25 per lo studio della segnalazione di Rab 25, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Rab25 critici per la funzione di Rab 25
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Rab25 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Rab 25 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal Rab 25 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Rab25. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Rab 25 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR Rab 25 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Rab25 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Rab25 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.