Rab 1A Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-422550

Panoramica

Rab1a codifica Rab 1A, una piccola GTPasi che regola il traffico secretorio precoce coordinando il trasporto vescicolare dal reticolo endoplasmatico (RE) al Golgi e all’interno del Golgi, inclusi gli eventi di gemmazione, ancoraggio (tethering) e fusione delle vescicole. Attraverso il ciclo tra gli stati legati a GTP e a GDP, Rab 1A interagisce con complessi effettori che influenzano l’organizzazione dell’apparato di Golgi, la processazione delle proteine e la consegna del carico, sostenendo così la proteostasi e l’omeostasi degli organelli. Il traffico dipendente da Rab1a si interfaccia con l’autofagia e con le vie lisosomiali controllando l’apporto di membrane e la maturazione dei compartimenti. La deregolazione del trasporto associato a Rab1a è stata collegata in letteratura a risposte di stress cellulare e a fenotipi rilevanti per la neurodegenerazione e per contesti di segnalazione oncogenica, rendendolo un nodo utile per studiare, in modelli murini, meccanismi di malattia guidati dal traffico di membrana.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Rab 1A (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Rab1a in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Rab1a insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Rab1a a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Rab 1A.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Rab1a per lo studio della segnalazione di Rab 1A, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Rab1a critici per la funzione di Rab 1A
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Rab1a per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Rab 1A CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal Rab 1A CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Rab1a. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Rab 1A Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR Rab 1A (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Rab1a per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Rab1a definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.