R1 Plasmide Double Nickase (h): sc-401712-NIC

RRM1 codifica la grande subunità catalitica (R1) della ribonucleotide reduttasi, che converte i ribonucleotidi in deossiribonucleotidi per fornire i dNTP necessari alla replicazione e alla riparazione del DNA. L’attività di R1 è strettamente coordinata con la progressione del ciclo cellulare, la segnalazione della risposta al danno al DNA e le vie legate allo stress replicativo, così da mantenere l’equilibrio dei pool di nucleotidi e la stabilità genomica. Un’espressione o una funzione di RRM1 deregolate sono associate ad alterazioni del controllo della proliferazione, a una ridotta capacità di riparazione del DNA e a fenotipi di instabilità genomica rilevanti per la biologia dei tumori e per i disturbi del metabolismo dei nucleotidi. In quanto nodo centrale dell’omeostasi dei dNTP, RRM1 è spesso studiato nel contesto della dinamica della replicazione, dell’attivazione dei checkpoint e della scelta delle vie di riparazione del DNA.

R1 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus RRM1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di RRM1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di RRM1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con RRM1 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.