R-Spondin2 Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-402648-LAC

Il gene umano **RSPO2** codifica **R-Spondin2**, un ligando matricellulare secreto che potenzia la segnalazione canonica **WNT/β-catenina** legandosi ai recettori **LGR4/5/6** e antagonizzando le ubiquitin-ligasi **RNF43/ZNRF3**, stabilizzando così i recettori **Frizzled** sulla superficie cellulare. Attraverso questo meccanismo, R-Spondin2 regola il mantenimento e la proliferazione delle cellule staminali epiteliali, nonché la morfogenesi tissutale, con effetti a valle sui programmi trascrizionali che controllano differenziamento e destino cellulare. L’attività di RSPO2 interseca vie che governano il rimodellamento della matrice extracellulare e il patterning dello sviluppo; inoltre, un’espressione alterata è stata associata a una deregolazione della segnalazione WNT nei tumori, oltre che a ruoli in fenotipi congeniti e infiammatori in sistemi sperimentali. Queste caratteristiche rendono RSPO2 un nodo utile per analizzare la modulazione fine della via WNT, le dinamiche recettore–ligando e output di segnalazione dipendenti dal contesto in modelli cellulari umani.

Le particelle di attivazione lentivirale R-Spondin2 (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di RSPO2 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale R-Spondin2 (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione RSPO2, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di R-Spondin2. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo RSPO2 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.