Pyrin Plasmide Double Nickase (h): sc-403193-NIC

MEFV codifica la pirina, un sensore dell’immunità innata arricchito nelle cellule mieloidi che regola la segnalazione dell’inflammasoma e l’attivazione delle caspasi infiammatorie in risposta a segnali legati al citoscheletro e alla modulazione delle GTPasi Rho. La pirina contribuisce a coordinare l’assemblaggio dei complessi dell’inflammasoma dipendente da ASC, influenzando la maturazione delle citochine della famiglia dell’IL-1 e le vie piroptotiche che modellano l’infiammazione guidata dai neutrofili. Un’attività di MEFV deregolata o la presenza di varianti è associata a fenotipi autoinfiammatori e a una soglia alterata delle risposte dell’immunità innata, rendendo questo locus utile per analizzare le reti di segnalazione infiammatoria. Nei sistemi cellulari umani, la perturbazione di MEFV è comunemente impiegata per studiare la regolazione dell’inflammasoma, la processazione delle citochine e il crosstalk tra la dinamica del citoscheletro e il riconoscimento dell’immunità innata.

Pyrin Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus MEFV nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di MEFV. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di MEFV. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con MEFV interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.