Pumilio 1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-406309

Panoramica

PUM1 codifica Pumilio 1, una proteina conservata legante l’RNA che riconosce gli elementi di risposta a Pumilio nelle regioni 3′ UTR per regolare stabilità, localizzazione e traduzione degli mRNA. Assemblando complessi regolatori post-trascrizionali, PUM1 modella programmi di espressione genica che controllano la progressione del ciclo cellulare, la differenziazione e il rimodellamento del trascrittoma in risposta allo stress. Pumilio 1 partecipa a vie del metabolismo dell’RNA, inclusi la repressione della traduzione, la degradazione degli mRNA e il coordinamento con la regolazione mediata dai microRNA. Un’attività deregolata di PUM1 è stata collegata ad alterazioni dei programmi di proteostasi e di mantenimento del genoma, ed è stata studiata nel contesto di fenotipi del neurosviluppo e neurodegenerativi, oltre che di reti regolatorie dell’RNA associate al cancro.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Pumilio 1 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene PUM1 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del PUM1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto PUM1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Pumilio 1.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di PUM1 per lo studio della segnalazione di Pumilio 1, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni PUM1 critici per la funzione di Pumilio 1
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di PUM1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Pumilio 1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal Pumilio 1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus PUM1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Pumilio 1 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR Pumilio 1 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia PUM1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio PUM1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.