Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
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PTP22 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-416917
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- PTP22 Il plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) è un pool di plasmidi, ciascuno dei quali codifica la nucleasi Cas9 e un RNA guida (gRNA) specifico per il bersaglio di 20 nt, progettato per la massima efficienza di knockout utilizzando sequenze derivate dalla libreria GeCKO v2
- Le sequenze gRNA indirizzano Cas9 a indurre rotture a doppio filamento (DSB) sito-specifiche nel locus genomico PTP22, con conseguente knockout genico tramite giunzione non omologa (NHEJ)
- I geni di resistenza alla puromicina e RFP sono fiancheggiati da siti LoxP, consentendo la rimozione dei marcatori di selezione tramite la ricombinasi Cre (Cre Vector: sc-418923) dopo aver stabilito linee cellulari knockout stabili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: PTP22 Antibody (E-5): sc-393766
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
PTP22 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h) | sc-416917 | 20 µg | $397.00 |
Panoramica
PTPN22 codifica la fosfatasi tirosinica proteica citosolica PTP22 (nota anche come LYP), un importante regolatore negativo della segnalazione dei recettori antigenici nelle cellule immunitarie. Attraverso la defosforilazione di intermedi di segnalazione a valle del recettore delle cellule T e di vie correlate, PTP22 modula le soglie di attivazione dei linfociti, la produzione di citochine e la tolleranza immunitaria. Le variazioni genetiche e l’alterata attività di PTPN22 sono fortemente associate alla suscettibilità a molteplici condizioni autoimmuni e infiammatorie, rendendolo un nodo ampiamente studiato nelle reti di segnalazione dei recettori immunitari. Studi funzionali collegano spesso PTP22 a vie che controllano l’equilibrio tra chinasi e fosfatasi prossimali, programmi trascrizionali dipendenti da NFAT/NF-κB e la differenziazione delle cellule immunitarie.
Il plasmide CRISPR/Cas9 KO PTP22 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene PTPN22 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del PTPN22 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.
Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto PTPN22 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina PTP22.
Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di PTPN22 per lo studio della segnalazione di PTP22, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.
Caratteristiche principali
- sgRNA mirati agli esoni PTPN22 critici per la funzione di PTP22
Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di PTPN22 per migliorare l'efficienza del knockout
Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione
Varianti di progettazione
CRISPR +/- HDR
- Gli gRNA codificati dal PTP22 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal PTP22 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus PTPN22. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
I costrutti donatori HDR codificati dal PTP22 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR PTP22 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia PTPN22 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio PTPN22 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.