PTP1B Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-400732-ACT

PTPN1 codifica la proteina tirosina fosfatasi 1B (PTP1B), una fosfatasi non recettoriale ancorata al versante citosolico del reticolo endoplasmatico che attenua la segnalazione defosforilando i recettori tirosin-chinasici attivati e i substrati associati. PTP1B modula le vie del recettore dell’insulina e della leptina e interseca cascate guidate dai fattori di crescita, incluse MAPK/ERK e PI3K–AKT, plasmando programmi cellulari quali l’omeostasi del glucosio, la proliferazione e la sopravvivenza. Grazie al suo ruolo nel modulare reti di segnalazione dipendenti dalla fosforilazione, un’alterata attività di PTPN1/PTP1B è stata collegata a disfunzioni metaboliche e a contesti di segnalazione oncogenica in cui l’attività dei recettori e delle chinasi a valle viene riorganizzata. Queste proprietà rendono PTPN1 un bersaglio utile per studi meccanicistici sulla segnalazione fosfotirosinica, sul controllo tramite feedback e sul cross-talk tra vie in modelli cellulari umani.

PTP1B Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di PTPN1 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

PTP1B Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus PTPN1 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione PTPN1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di PTP1B. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus PTPN1 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da PTP1B nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via PTP1B nelle cellule tumorali con espressione di PTPN1 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.