Plásmido CRISPR de Activación (h) PTPμ: sc-403126-ACT

PTPRM codifica la fosfatasa tirosina proteica tipo receptor mu (PTPμ), una fosfatasa transmembrana de paso único que media la adhesión célula–célula homofílica y acopla los contactos extracelulares a la desfosforilación de tirosinas en el interior de la célula. Mediante la regulación de los complejos cadherina–catenina y de sustratos de las uniones celulares, PTPμ influye en la función de barrera epitelial y endotelial, la migración celular y la organización del citoesqueleto. La actividad de PTPRM se cruza con la señalización de receptores tirosina quinasa y con vías posteriores como MAPK y PI3K/AKT, ajustando umbrales de señalización dependientes de la fosforilación. La alteración de la expresión de PTPRM o del control de su fosforilación se ha asociado con una adhesión desregulada y fenotipos invasivos en múltiples contextos relevantes para enfermedades, lo que la convierte en un nodo útil para estudios mecanísticos de la organización tisular y el equilibrio de la señalización.

PTPμ El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de PTPRM sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

PTPμ El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus PTPRM en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional PTPRM, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de PTPμ. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo PTPRM y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de PTPμ en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía PTPμ en células tumorales con expresión de PTPRM silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.