PTPε Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-405606

Panoramica

PTPRE codifica la proteina tirosina fosfatasi epsilon (PTPε), una fosfatasi di tipo recettoriale e citosolica che modula la segnalazione rimuovendo i gruppi fosfato da residui di fosfotirosina su substrati chinasi chiave. PTPε partecipa al controllo dell’output delle vie MAPK e JAK/STAT e può modulare la segnalazione delle tirosin-chinasi recettoriali e delle chinasi della famiglia Src, influenzando proliferazione, adesione e migrazione cellulare, nonché le soglie di attivazione delle cellule immunitarie. Modellando reti di segnalazione dipendenti dalla fosforilazione, PTPε viene studiata in contesti di segnalazione dei fattori di crescita deregolata, segnalazione infiammatoria e rimodellamento oncogenico delle vie di segnalazione. La localizzazione e l’attività specifiche delle diverse isoforme rendono PTPRE un nodo utile per analizzare il controllo compartimentalizzato esercitato dalle fosfatasi sulla segnalazione cellulare.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO PTPε (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene PTPRE in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del PTPRE insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto PTPRE a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina PTPε.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di PTPRE per lo studio della segnalazione di PTPε, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni PTPRE critici per la funzione di PTPε
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di PTPRE per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal PTPε CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal PTPε CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus PTPRE. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal PTPε Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR PTPε (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia PTPRE per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio PTPRE definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.