PSS2 Particelle di Attivazione Lentivirale (m): sc-424258-LAC

Il gene murino *Ptdss2* codifica la fosfatidilserina sintasi 2 (PSS2), un enzima chiave di membrana del reticolo endoplasmatico che catalizza la produzione di fosfatidilserina tramite reazioni di scambio di base, contribuendo all’omeostasi dei fosfolipidi cellulari. La fosfatidilserina è essenziale per la biogenesi delle membrane, l’identità degli organelli, il traffico vescicolare e i processi di segnalazione legati all’apoptosi e al riconoscimento immunitario, e contribuisce alle proprietà strutturali e funzionali delle membrane associate ai mitocondri. L’attività di PSS2 collega le vie del metabolismo lipidico alle risposte allo stress cellulare e alla bioenergetica, modulando la composizione di membrana e lo scambio di lipidi tra organelli. La disregolazione del metabolismo della fosfatidilserina è stata associata ad alterazioni della segnalazione di membrana e a squilibri lipidici rilevanti per modelli di malattia in ambito metabolico e neurobiologico.

Le particelle di attivazione lentivirale PSS2 (m) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di Ptdss2 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale PSS2 (m) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione Ptdss2, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di PSS2. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo Ptdss2 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.