PSPC1 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-401728-ACT

PSPC1 (paraspeckle component 1) è una proteina legante l’RNA e un elemento strutturale centrale dei paraspeckle nucleari, che coordina la regolazione genica a livello trascrizionale e post-trascrizionale. Attraverso interazioni con lunghi RNA non codificanti come NEAT1 e con altri membri della famiglia DBHS, PSPC1 contribuisce a organizzare complessi ribonucleoproteici che influenzano il processamento dell’RNA, la ritenzione nucleare e programmi di espressione genica responsivi allo stress. L’attività di PSPC1 si interseca con la regolazione della cromatina e con vie del metabolismo dell’RNA che modellano le transizioni di stato cellulare e le risposte adattative. Una biologia dei paraspeckle deregolata e un’alterata espressione di PSPC1 sono state associate a fenotipi rilevanti per il cancro e ad altre condizioni in cui le reti regolatorie dell’RNA risultano perturbate, rendendolo un bersaglio utile per studi meccanicistici.

PSPC1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di PSPC1 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

PSPC1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus PSPC1 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione PSPC1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di PSPC1. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus PSPC1 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da PSPC1 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via PSPC1 nelle cellule tumorali con espressione di PSPC1 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.