PSGL-1 Plasmide Double Nickase (h): sc-401534-NIC

SELPLG codifica per il ligando glicoproteico della P-selectina-1 (PSGL-1), una glicoproteina di superficie cellulare di tipo mucinico, sialilata e fucosilata, espressa sulla maggior parte dei leucociti, che media l’aggancio iniziale e il rotolamento sull’endotelio attivato tramite il legame con le selectine P, E e L. Attraverso il suo ruolo nell’adesione dipendente dalle selectine, PSGL-1 coordina le fasi precoci del reclutamento leucocitario, della transmigrazione e del traffico delle cellule infiammatorie, integrandosi con la segnalazione delle chemochine e con l’attivazione delle integrine per stabilizzare le interazioni tra leucociti ed endotelio. PSGL-1 partecipa anche al crosstalk tra leucociti e piastrine e può influenzare i programmi di attivazione immunitaria a valle modulando segnali dipendenti dal contatto cellulare. Un’alterazione della biologia PSGL-1–selectine è implicata in patologie infiammatorie croniche, infiammazione vascolare, reclutamento leucocitario associato alla trombosi e contesti di ricerca sulla metastasi associata al cancro, rendendo SELPLG un bersaglio utile per studi meccanicistici sull’adesione e sulla regolazione immunitaria.

PSGL-1 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus SELPLG nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di SELPLG. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di SELPLG. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con SELPLG interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.