PRX IV Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-424704

Panoramica

Prdx4 codifica la perossiredossina IV (PRX IV), una perossidasi tiolo‑dipendente localizzata nel reticolo endoplasmatico che riduce il perossido di idrogeno e gli idroperossidi organici, contribuendo a mantenere l’omeostasi redox nelle cellule che producono proteine secretorie e di membrana. Nel lume del RE, PRX IV aiuta a modellare il ripiegamento ossidativo delle proteine accoppiando la detossificazione dei perossidi alla formazione di ponti disolfuro, influenzando la proteostasi e la segnalazione della risposta alle proteine mal ripiegate (UPR) durante lo stress del RE. Attraverso il controllo delle specie reattive dell’ossigeno locali, PRX IV può modulare vie redox‑sensibili che incidono su infiammazione, sopravvivenza cellulare e adattamento metabolico. Uno squilibrio della bilancia redox del RE e un’attività deregolata di PRX IV sono stati associati a fenotipi legati allo stress ossidativo rilevanti per la biologia del cancro, le malattie metaboliche e i processi infiammatori, rendendo Prdx4 un nodo utile per studi meccanicistici in sistemi murini.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO PRX IV (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Prdx4 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Prdx4 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Prdx4 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina PRX IV.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Prdx4 per lo studio della segnalazione di PRX IV, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Prdx4 critici per la funzione di PRX IV
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Prdx4 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal PRX IV CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal PRX IV CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Prdx4. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal PRX IV Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR PRX IV (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Prdx4 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Prdx4 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.