PRX III Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-401730

Panoramica

PRDX3 codifica la perossiredossina III (PRX III), una perossidasi mitocondriale dipendente dalla tioredossina che detossifica il perossido di idrogeno e gli idroperossidi lipidici per preservare l’equilibrio redox. Tamponando le specie reattive dell’ossigeno (ROS) mitocondriali, PRX III sostiene la fosforilazione ossidativa, limita il danno ossidativo al DNA mitocondriale e alle proteine, e influenza la segnalazione redox-sensibile e l’apoptosi. L’attività di PRDX3 interagisce con i sistemi antiossidanti mitocondriali, come tioredossina 2/tioredossina reduttasi, e contribuisce al mantenimento dell’integrità mitocondriale in condizioni di stress metabolico e infiammatorio. Un’alterata espressione o funzione di PRDX3 è stata associata a fenotipi da stress ossidativo ed è oggetto di studio nel contesto di patologie in cui sono implicate la disregolazione redox mitocondriale, la segnalazione di sopravvivenza cellulare e la riprogrammazione metabolica.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO PRX III (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene PRDX3 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del PRDX3 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto PRDX3 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina PRX III.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di PRDX3 per lo studio della segnalazione di PRX III, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni PRDX3 critici per la funzione di PRX III
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di PRDX3 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal PRX III CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal PRX III CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus PRDX3. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal PRX III Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR PRX III (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia PRDX3 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio PRDX3 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.