PRX III CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-401730

Übersicht

PRDX3 kodiert Peroxiredoxin III (PRX III), eine in den Mitochondrien lokalisierte, thioredoxinabhängige Peroxidase, die Wasserstoffperoxid und Lipidhydroperoxide entgiftet und so das Redoxgleichgewicht aufrechterhält. Durch das Abpuffern mitochondrialer reaktiver Sauerstoffspezies unterstützt PRX III die oxidative Phosphorylierung, begrenzt oxidative Schäden an mitochondrialer DNA und Proteinen und beeinflusst redoxsensitive Signalwege sowie die Apoptose. Die PRDX3-Aktivität ist mit mitochondrialen antioxidativen Systemen wie Thioredoxin 2/Thioredoxin-Reduktase verknüpft und trägt zur Aufrechterhaltung der mitochondrialen Integrität unter metabolischem und entzündlichem Stress bei. Eine veränderte PRDX3-Expression oder -Funktion wurde mit Phänotypen oxidativen Stresses in Verbindung gebracht und wird im Kontext von Erkrankungen untersucht, bei denen eine mitochondriale Redox-Dysregulation, Signalwege des Zellüberlebens und metabolische Umprogrammierung eine Rolle spielen.

Das PRX III CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des PRDX3-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des PRDX3-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von PRDX3 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die PRX III-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von PRDX3-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der PRX III-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf PRDX3-Exone abzielen, die für die PRX III-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere PRDX3-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom PRX III CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom PRX III CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des PRDX3-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das PRX III HDR-Plasmid (h) und PRX III HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von PRDX3-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten PRDX3-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.