PRX I Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-418249-ACT

PRDX1 codifica la perossiredossina I umana (PRX I), una perossidasi tiolo-dipendente che riduce il perossido di idrogeno e gli idroperossidi organici per mantenere l’omeostasi redox cellulare. Agendo da tampone delle specie reattive dell’ossigeno, PRX I influenza reti di segnalazione redox-sensibili che regolano proliferazione, apoptosi e adattamento allo stress, inclusi processi legati a MAPK e NF-κB. PRX I contribuisce inoltre al controllo di qualità delle proteine attraverso la chimica di “redox relay” e può modulare le risposte infiammatorie plasmando i segnali ossidativi. Un’espressione deregolata di PRDX1 o alterazioni del suo stato di ossidazione sono state associate a una gestione anomala dello stress ossidativo osservata nella biologia del cancro, nella neurodegenerazione e nelle disfunzioni metaboliche, rendendolo un nodo utile per studi meccanicistici della segnalazione redox.

PRX I Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di PRDX1 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

PRX I Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus PRDX1 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione PRDX1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di PRX I. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus PRDX1 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da PRX I nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via PRX I nelle cellule tumorali con espressione di PRDX1 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.