Protamine 2 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-402337-ACT

PRM2 codifica la protamina 2, una proteina legante il DNA specifica degli spermatozoi, ricca di arginina, che sostituisce gli istoni nelle fasi tardive della spermiogenesi per promuovere la condensazione della cromatina e la compattazione del nucleo. Questa transizione è una componente chiave della differenziazione degli spermatidi e del confezionamento del genoma, influenzando la morfologia della testa dello spermatozoo, l’integrità del DNA e l’organizzazione epigenetica nella linea germinale maschile. Un’alterata espressione di PRM2 o uno squilibrio tra protamine è associato a un rimodellamento difettoso della cromatina, a un aumento della frammentazione del DNA e a parametri seminali compromessi, rendendolo rilevante per gli studi sulla biologia riproduttiva maschile e sui meccanismi associati all’infertilità. PRM2 viene comunemente valutato insieme ad altri fattori di rimodellamento della cromatina per indagare il controllo molecolare della spermiogenesi e della maturazione delle cellule germinali.

Protamine 2 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di PRM2 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

Protamine 2 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus PRM2 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione PRM2, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di Protamine 2. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus PRM2 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da Protamine 2 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via Protamine 2 nelle cellule tumorali con espressione di PRM2 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.