Prostein Plasmide Double Nickase (h): sc-406577-NIC

SLC45A3 codifica la prostein, una proteina di membrana multipasso arricchita nella prostata che si localizza prevalentemente nell’apparato di Golgi e contribuisce ai processi secretori e di traffico dell’epitelio. La sua espressione è regolata dalla segnalazione mediata dal recettore degli androgeni ed è comunemente utilizzata come marcatore molecolare del lignaggio prostatico e dello stato di differenziamento. Alterazioni dei pattern di espressione di SLC45A3 e riarrangiamenti genici ricorrenti che coinvolgono il locus SLC45A3 sono stati descritti nella biologia del carcinoma prostatico, a supporto della sua utilità nello studio dei programmi trascrizionali responsivi agli androgeni. La perturbazione funzionale della prostein offre una via sperimentalmente gestibile per interrogare il traffico di membrana, l’omeostasi del Golgi e le reti regolatorie associate al lignaggio in sistemi modello umani derivati dalla prostata.

Prostein Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus SLC45A3 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di SLC45A3. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di SLC45A3. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con SLC45A3 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.