Progesterone Receptor Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-400198-ACT

PGR codifica il recettore umano del progesterone, un recettore nucleare per ormoni attivato dal legando che agisce come fattore di trascrizione per coordinare programmi genici dipendenti dal progesterone. Dopo il legame con l’ormone, PGR regola l’accessibilità della cromatina e le reti trascrizionali che controllano lo sviluppo dei tessuti riproduttivi, la progressione del ciclo cellulare, la differenziazione e la segnalazione infiammatoria, attraverso un cross-talk con co-regolatori dei recettori steroidei e con le vie MAPK/PI3K. L’attività specifica delle isoforme (PR-A e PR-B) modula risposte dipendenti dal contesto in endometrio, mammella e ovaio, influenzando la comunicazione epitelio–stroma e la responsività ormonale. La disregolazione della segnalazione di PGR e l’alterata espressione del recettore sono spesso studiate nei tumori ormono-responsivi e nei disturbi riproduttivi, dove incidono su proliferazione, invasività e meccanismi di resistenza endocrina.

Progesterone Receptor Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di PGR senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

Progesterone Receptor Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus PGR nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione PGR, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di Progesterone Receptor. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus PGR nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da Progesterone Receptor nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via Progesterone Receptor nelle cellule tumorali con espressione di PGR silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.