PRMT7 Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-417516-LAC

PRMT7 codifica per la protein arginine metiltransferasi 7, una PRMT prevalentemente di tipo III che catalizza la dimetilazione simmetrica dei residui di arginina su substrati istonici e non istonici. Attraverso questa regolazione epigenetica e post-traduzionale, PRMT7 influenza l’organizzazione della cromatina, il controllo della trascrizione e i processi associati all’RNA che modellano la differenziazione cellulare e le risposte allo stress. L’attività di PRMT7 si interseca con la segnalazione del danno al DNA e con programmi genici metabolici e infiammatori modulando le interazioni proteina–proteina e l’accessibilità dei fattori di trascrizione. Un’espressione o una segnalazione deregolate di PRMT7 sono state associate ad alterazioni della capacità proliferativa e della specificazione di linea nel cancro e in altri disturbi, in cui il rimodellamento epigenetico contribuisce alla fisiopatologia.

Le particelle di attivazione lentivirale PRMT7 (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di PRMT7 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale PRMT7 (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione PRMT7, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di PRMT7. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo PRMT7 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.