PRMT7 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-417516-ACT

PRMT7 (protein arginine methyltransferase 7) é uma PRMT do tipo III que catalisa a monometilação de resíduos de arginina em histonas e em substratos não histônicos, moldando a acessibilidade da cromatina e as interações proteína–proteína. Por meio da regulação de programas transcricionais, de processos associados ao RNA e de respostas ao estresse celular, a PRMT7 contribui para o controle da proliferação, diferenciação e sinalização relacionada a danos no DNA. Alterações na atividade da PRMT7 têm sido associadas a estados epigenéticos desregulados e à remodelação de vias observadas em múltiplos contextos de doença, incluindo a reprogramação transcricional associada ao câncer. Como metiltransferase que interage com a cromatina e redes regulatórias, a PRMT7 é frequentemente estudada em mecanismos de controle da expressão gênica e em fenótipos dependentes do epigenoma.

PRMT7 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de PRMT7 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

PRMT7 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus PRMT7 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição PRMT7, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de PRMT7. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus PRMT7 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de PRMT7 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via PRMT7 em células tumorais com expressão de PRMT7 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.