PRMT5 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401115-ACT

A PRMT5 (protein arginine methyltransferase 5) é uma metiltransferase de arginina do tipo II que catalisa a dimetilação simétrica de resíduos de arginina em histonas e em diversos substratos não histônicos, moldando a estrutura da cromatina e programas transcricionais. Por meio de interações com cofatores como WDR77/MEP50, a PRMT5 influencia o splicing de RNA, a biogênese de ribossomos, as respostas a danos no DNA e o controle do ciclo celular, conectando a regulação epigenética à proteostase e à manutenção do genoma. A atividade da PRMT5 se cruza com vias que governam a diferenciação e a sinalização de estresse, e sua desregulação tem sido associada a estados transcricionais alterados observados em múltiplos cânceres e em contextos de perturbações do neurodesenvolvimento e do sistema imunológico.

PRMT5 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de PRMT5 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

PRMT5 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus PRMT5 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição PRMT5, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de PRMT5. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus PRMT5 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de PRMT5 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via PRMT5 em células tumorais com expressão de PRMT5 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.