PRL-R Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-400814-LAC

PRLR codifica il recettore della prolattina (PRL-R), un recettore di classe I per le citochine che lega la prolattina e regola la differenziazione epiteliale, la segnalazione lattogena e l’omeostasi tissutale in molteplici organi. La dimerizzazione del recettore indotta dal ligando attiva JAK2/STAT5, oltre alle vie PI3K/AKT e MAPK/ERK, coordinando programmi trascrizionali legati a proliferazione, sopravvivenza ed espressione genica responsiva agli ormoni. La segnalazione mediata da PRLR è ampiamente studiata nel contesto della regolazione endocrina e della modulazione immunitaria, e la deregolazione dell’attività della via PRL-R è stata associata ad alterazioni del controllo della crescita e a fenotipi oncogeni nei tessuti sensibili agli ormoni. Di conseguenza, PRLR viene frequentemente analizzato come nodo di collegamento tra la segnalazione dei recettori per citochine e output trascrizionali dipendenti dal contesto, nonché comportamenti cellulari rilevanti per la malattia.

Le particelle di attivazione lentivirale PRL-R (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di PRLR in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale PRL-R (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione PRLR, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di PRL-R. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo PRLR e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.