PRELI Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-411975-LAC

Il gene umano PRELID1 codifica PRELI, una proteina dello spazio intermembrana mitocondriale che partecipa al traffico intramitocondriale dei lipidi e sostiene l’architettura della membrana mitocondriale e l’omeostasi bioenergetica. PRELI svolge un ruolo in processi legati alla gestione dei fosfolipidi e al mantenimento delle creste, influenzando le prestazioni della catena respiratoria, l’equilibrio redox e la suscettibilità allo stress mitocondriale. La regolazione alterata di PRELID1/PRELI è stata esaminata in contesti di disfunzione mitocondriale, in cui una composizione lipidica perturbata e una fosforilazione ossidativa compromessa possono contribuire alla vulnerabilità cellulare. Queste caratteristiche rendono PRELI rilevante per studi meccanicistici sul controllo di qualità mitocondriale, l’adattamento metabolico e le vie di segnalazione dello stress.

Le particelle di attivazione lentivirale PRELI (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di PRELID1 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale PRELI (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione PRELID1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di PRELI. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo PRELID1 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.